(一)培養(yǎng)基的制備方法
1．選定培養(yǎng)基配方，制備培養(yǎng)基記錄
首先查閱資料，確定培養(yǎng)基的配方，同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此，除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法，應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進行配制外，一般均應(yīng)盡量搜集有關(guān)資料，加以比較核對，再依據(jù)自己的使用目的，加以選用，記錄其來源。檢查配制培養(yǎng)基所用的材料、試劑是否齊全，數(shù)量及質(zhì)量(純度、期限)是否合格；同時還要準(zhǔn)備好配制培養(yǎng)基所用的各種設(shè)備和裝置。微生物檢驗實驗室需要經(jīng)常配制不同種類的培養(yǎng)基．有必要建立培養(yǎng)基的制備記錄。記錄主要包括培養(yǎng)基名稱、配方、試劑來源及批號、培養(yǎng)基zui終pH值、滅菌條件、制備的日期、制備者等內(nèi)容，原始記錄保存?zhèn)洳椋€應(yīng)復(fù)制一份記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放．以防發(fā)生混亂。
2．培養(yǎng)基成分的稱取
配置培養(yǎng)基所用的化學(xué)藥品均應(yīng)該是化學(xué)純的，一般可用1/100的天平稱量．根據(jù)培養(yǎng)基的配方計算出各成分用量．進行準(zhǔn)確稱量。培養(yǎng)基的各種成分必須注意防止錯亂，一次完成，不要中斷。可將配方置于旁側(cè)，每稱完一種成分即在配方處做出記號，并將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱取完畢后，即移放于右側(cè)。*稱取完畢后，還應(yīng)進行一次檢查。稱量好的藥品放人適當(dāng)大小的燒杯中．瓊脂不要加入。蛋白胨極易吸潮，故稱量時要迅速。加入的一般培養(yǎng)基配方用1000mI。培養(yǎng)基中所含各種成分的質(zhì)量(g)來表示。配制時應(yīng)先估計實際需要培養(yǎng)基的用量．然后按比例計算各種藥品的用量。
3．加熱溶化培養(yǎng)基
用量簡取一定量(占總量的1／2～2／3)的蒸餾水，倒人盛有藥品的容器(搪瓷缸、不銹鋼鍋或燒杯)中，不得使用鐵鍋、銅鍋，以防有微量銅或者鐵混入培養(yǎng)基中+使細菌不能生長。把容器在放有石棉網(wǎng)的電爐上小火加熱．并用玻棒攪拌．以防液體溢出或者焦化。如果發(fā)生焦化現(xiàn)象則需要重新配置培養(yǎng)基。待各種藥品*溶解后，停止加熱，補足水分。如果配方中有淀粉，則先將淀粉用少量冷水調(diào)成糊狀，并在火上加熱攪拌．然后加足水分及其他原料，待*溶化后，補足水分；
溶化瓊脂時如需制成固體培養(yǎng)基，應(yīng)在已配好的液體培養(yǎng)基呈沸騰狀態(tài)下加入1．5％～2．0％瓊脂條(用剪刀切碎)或瓊脂粉，并用玻棒不斷攪拌，同時注意控制火力．以免糊底燒焦及防止溢出。繼續(xù)加熱至瓊脂全部溶化．zui后補足因蒸發(fā)而失去的水分。或者將瓊脂單獨溶化30min，用一部分水溶化其他成分，然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中，因蒸發(fā)而丟失的水分，zui后必須補足。在制備用三角瓶盛固體培養(yǎng)基時，一般也可先將一定量的液體培養(yǎng)基分裝于三角瓶中，然后按1．5％～2．0％的量將瓊脂直接加入各三角瓶中．不必加熱溶化；而是滅菌和加熱溶化同步進行．以節(jié)省時間。
4．調(diào)節(jié)pH值
因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中，pH值會有所改變．培養(yǎng)基各成分充分溶解后，應(yīng)進行pH值的初步調(diào)整。例如．牛肉浸液約可降低pH值0．2．而腸浸液pH值卻會有顯著的升高。因此．對這個步驟，操作者應(yīng)隨時注意探索經(jīng)驗，掌握培養(yǎng)基的zui終pH值，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。
取適當(dāng)范圍的精密pH值試紙一小條，用玻璃棒蘸取少許待測培養(yǎng)基滴在試紙上，與比色板對照顏色，測定所配培養(yǎng)基的pH值。如培養(yǎng)基偏酸或偏堿時一可用1mol／LNaOH溶液或1mol／L HCl溶液逐滴緩慢加入，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙檢測·直至達到所需pH值范圍為止。pH值的調(diào)節(jié)通常放在加瓊脂之前，pH值調(diào)整后，還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘，以利于培養(yǎng)基沉淀物的析出．另外調(diào)節(jié)pH值時應(yīng)注意以下幾點問題：
①培養(yǎng)基必須冷卻至室溫時才可調(diào)節(jié)pH值。
②加酸或堿溶液時．要緩慢少量加入，并多加攪拌，防止局部過酸或過堿而破壞培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分。
③pH值一次調(diào)成功，否則回調(diào)會影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。
④配制pH值低的瓊脂培養(yǎng)基時，若預(yù)先調(diào)好pH值并在高壓蒸汽下滅菌．則瓊脂因水解不能凝固。因此．應(yīng)將培養(yǎng)基的成分和瓊脂分開滅菌后再混合，或在中性pH值條件下滅菌．再調(diào)整pH值。
⑤有些微生物要求pH值較．可用酸度計調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值。
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